Shabarni Gaffar, S.Si., M.Si. Dr. Maelita R. Moeis Prof. Dr. Soetijoso Soemitro Fakultas: MIPA Sumberdana: Hibah Bersaing Tahun: 2010 Abstrak: Protein disulfide isomerase (PDI) merupakan salah satu faktor pelipatan protein yang berperan pada oksidasi dan isomerisasi ikatan disulfida natif pada protein yang baru disintesis, sehingga menjamin ketepatan pelipatan protein. Peningkatan jumlah protein ini pada suatu inang ekspresi akan meningkatkan ekspresi protein rekombinan. Jika komponen pelipatan protein dalam inang dinaikkan jumlahnya, maka jumlah protein asing yang mengalami pelipatan dengan benar didalam retikulum endoplasma akan meningkat, sehingga akan diperoleh kenaikan jumlah protein asing yang dihasilkan. Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan sekresi ?-amilase oleh P. pastoris rekombinan yang telah membawa gen pengode ?-amilase (ALP1) melalui penambahan faktor pelipatan protein yaitu Protein Disulfida Isomerase (PDI). Penambahan PDI dilakukan melalui ko-ekspresi PDI dalam P. pastoris rekombinan. Pada penelitian ini telah berhasil dilakukan konstruksi dan kloning gen PDI1 dalam vektor ekspresi pPIC3.5K. Karakterisasi terhadap plasmid rekombinan pPIC3.5K-PDI1 menunjukkan bahwa gen PDI1 telah berhasil dikloning menggunakan vektor ekspresi. Selanjutnya plasmid rekombinan pPIC3.5K-PDI1 telah berhasil digunakan untuk mentransformasi P. pastoris MS-20 yang membawa gen ALP1 menjadi P. pastoris MS-20-PDI yang membawa gen ALP1 dan PDI1. Transforman P. pastoris ini telah digunakan untuk mengekspresikan ?-amilase rekombinan dan dilihat pengaruh penambahan PDI terhadap tingkat ekspresi ?-amilase. Hasil penentuan aktivitas ?-amilase memperlihatkan bahwa aktivitas ?-amilase pada transforman P. pastoris yang mengandung gen PDI1, 2x lebih tinggi dibanding P. pastoris yang tidak mengandung gen PDI1. Aktivitas ?-amilase tertinggi pada P. pastoris MS-20-PDI diperoleh pada jam ke 72 setelah induksi, yaitu sebesar 650,72 U/mL dengan kadar protein sekitar 1,067 mg/mL, sedangkan pada P. pastoris MS-20 aktivitas ?-amilase tertinggi diperoleh pada jam ke 48 sebesar 353,85 U/mL dengan kadar protein sekitar 1,069 mg/mL. Berdasarkan perhitungan, maka diperoleh aktivitas spesifik tertinggi ?-amilase yang dihasilkan oleh P. pastoris MS-20-PDI adalah 609,85 dibandingkan dengan P. pastoris MS-20 yaitu 331,0. Hasil penelitian ini memperlihatkan bahwa dengan kadar protein yang sama, P. pastoris MS-20-PDI menghasilkan amilase 2x lebih banyak dibandingkan dengan MS-20, yang menunjukkan bahwa ko-ekspresi (penambahan) faktor pelipatan protein dapat meningkatkan ekspresi sekresi ?-amilase oleh P. pastoris Kata kunci: Protein disulfida isomerase (PDI), pelipatan protein, ?-amilase, Pichia pastoris, pPIC3,5K-PDI